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人單個(gè)核細(xì)胞分離液1.077是一種用于分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的無(wú)菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。外周血中單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度較大，1.090g/mL 左右，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為 1.075~1.090g/mL，血小板為1.030~1.035g/mL。為此利用一種密度介于 1.075～1.092 之間而近于等滲的。

人單個(gè)核細(xì)胞分離液1.077使用說(shuō)明：

1、取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可），用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2、在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時(shí)，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町悾瑢⑿纬擅黠@的分層界面。如果樣品較多加樣時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前會(huì)出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象。）

3、室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速大不超過(guò)1200g）。

4、離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為單個(gè)核細(xì)胞層，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。

5、小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。250g，離心10min。

6、棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。

7、重復(fù)步驟6

8、棄上清，細(xì)胞重懸備用。